分子触媒ジャーナル B: 酵素
第 111 巻、2015 年 1 月、36 ～ 42 ページ

遺伝子操作されたプロテウス種の部位特異的修飾。ポリエチレングリコール誘導体を含むリパーゼ K107 変異体

ハイライト
…我々は、タンパク質の部位特異的ペグ化のための新しい方法を報告します。
・さまざまなサイズの直鎖状 mPEG は、ドーパミンを介して官能化されました。
・PEG 誘導体は、単一の Cys 残基による酵素の部位特異的 PEG 化に使用されました。
・PEG化酵素は二次構造と活性を維持しており、低分子量PEGコンジュゲートの方が活性が高かった
。 ・触媒中心近くのポリマーカップリング部位との結合体はより安定でした。

要約

PEG化として知られる標的タンパク質へのPEGの共有結合は、広範な生物医学およびバイオテクノロジーに応用されています。特に、部位特異的PEG化は、生物活性の保存、結合タンパク質の安定性の向上、および高度の均一性の達成という独特の特性により広く使用されています。この研究では、さまざまなサイズ (MW = 5、12、および 20 kDa) の直鎖状 mPEG がドーパミンを介して官能化され、Proteus sp. の部位特異的 PEG 化に使用されました。タンパク質の溶媒にアクセス可能な表面に部位特異的突然変異誘発によって単一の Cys 残基が導入されたリパーゼ K107 誘導体。結合の特異性は SDS-PAGE および MALDI-TOF 質量分析によって検証され、結合体の二次構造は円二色性によって検証されました。 PEG化酵素は活性を保持しており、低分子量PEGコンジュゲートの方が活性が高かった。重要なことは、酵素の pH と熱安定性の両方が、特に塩基性 pH および室温以上で、PEG 化によって強化されたことです。さらに、触媒中心近くのポリマー結合部位との結合体はより安定でした。これらの結果は、他の酵素にも応用できる可能性がある、カテコール官能基化PEGを介した部位特異的タンパク質修飾の新規で効率的な方法を実証している 24 。
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