Int J Biol マクロモル。 2018 年 5 月:111:1032-1039。土井: 10.1016/j.ijbiomac.2018.01.134。 Epub 2018 Jan 31.
熱安定性と触媒効率を高めるための組換えホスホリパーゼ C の SS-mPEG 化学修飾
Xian Fang 1、Xueting Wang 1、Guiling Li 2、Jun Zeng 2、Jian Li 2、Jingwen Liu 3
要約
PEG 化は、これは、タンパク質の特性および酵素の物理的および熱的安定性を改善するための最も有望で広範囲に研究された戦略です。リン脂質を加水分解するホスホリパーゼ C は、さまざまな分野で多大な用途を提供します。しかし、熱安定性が低く、製造コストが高いため、その産業用途は制限されています。この研究は、メトキシポリエチレングリコール-コハク酸スクシンイミジル (SS-mPEG、分子量 5000) による化学修飾による組換え PLC の安定性の向上に焦点を当てました。分離株バチルス セレウス HSL3 からの PLC 遺伝子を、新規の小型ユビキチン関連修飾因子発現ベクターである SUMO と融合し、大腸菌で過剰発現させました。 SUMO-PLC の可溶性画分は、全組換えタンパク質の 80% に達しました。この酵素は 80 °C で最大の触媒活性を示し、40 ～ 70 °C では比較的熱安定性でした。これは広範な基質特異性パターンとホスファチジルコリンに対する顕著な活性を示し、工業目的の典型的な非特異的 PLC となりました。 SS-mPEG-PLC 複合体は 70 ～ 80 °C で熱安定性が向上し、触媒効率 (Kcat/Km) は遊離 PLC と比較して 3.03 倍増加しました。 SS-mPEG-PLC の CD スペクトルは、化学修飾後の酵素凝集の可能性を示し、これが SS-mPEG-PLC のより高い熱安定性に寄与しました。二次構造における逆平行βシートの増加により、平行βシートよりも安定性が増した。酵素分子表面に SS-mPEG 鎖が存在すると、基質の結合速度が若干変化し、触媒効率が大幅に向上しました。この研究は、高温でのホスホリパーゼ C の産業用途を強化するための SS-mPEG の添加に関する洞察を提供しました。
キーワード:酵素の性質。ホスホリパーゼC;組換え発現; SS-mPEG修飾;熱安定性と触媒効率。
関連製品
略称: mPEG-SS
名称:メトキシポリ(エチレングリコール) スクシンイミジルコハク酸塩
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